尼达尼布(nintedanib)靶向的受体酪氨酸激酶在MPM细胞(系统自动过滤词)表达。

  尼达尼布(nintedanib)的关键分子靶点的转录水平在20个MPM细胞系中被测定,作为对照,在Met5a永生化间皮细胞系和三种初级间皮细胞培养中被测定。PDGFRA、VEGFR1-3、FGFR2和FGFR3仅在部分细胞系中表达,且表达水平相对较低,而PDGFRB和FGFR1mrna能够在每个肿瘤细胞系和大多数非恶性对照细胞系中检查到,尽管表达水平不同。

  重要的是,所有MPM细胞系都对PDGFRB和FGFR1呈双阳性。此外,与对照间皮细胞相比,MPM细胞中的FGFR1表达上升。值得注意的是,这些数据都与尼达尼布(nintedanib)敏感性无关。根据MPM细胞的组织学亚型。这两种RTKs和其他靶受体(数据未显示)都没有表现出组织型特异性表达谱。而肉瘤样和双相MPM细胞表现出相似的表达模式,上皮样细胞则表现出更多的异质性。

  尼达尼布(nintedanib)抑制体外MPM生长。

  将不同浓度的尼达尼布(nintedanib)暴露于间皮细胞和MPM细胞72小时。用SRB法测定细胞活力,绘制剂量-响应曲线,确定各细胞系的IC50值。Met5a和NP3对照细胞系的IC50值区别为1.1和4.1mol/L。MPM细胞对IC50在1.6~5.9mol/L范围内表现出广泛的敏感性,与组织学亚型无关或靶RTKs的mRNA表达谱(数据未显示)。在长期生长试验中,用尼达尼布(nintedanib)处置MPM细胞10天,尼达尼布(nintedanib)可以在低得多的浓度下有效抑制克隆生成。

  由于尼达尼布(nintedanib)靶向的RTKs被证明能够干扰其他癌症的化学疗法,我们接下来分析尼达尼布(nintedanib)是否对两种不同的人MPM细胞系p31和SPC111的化学疗法敏感性有影响。SPC111细胞对尼达尼布(nintedanib)的抗性强于p31细胞(IC50s区别为5.9和1.9mol/L)。就对顺铂的敏感性而言,p31比SPC111更耐受药物(IC50s区别为4.3和0.7mol/L)。两种细胞系中的FGFR1表达水平相似,而p31细胞中的PDGFRB转录本水平较高。尼达尼布(nintedanib)的另一个靶点RTKs在两种细胞系的mRNA水平上均未检查到。

  值得注意的是,在一定浓度下,我们观察到尼达尼布(nintedanib)和已建立的化学疗法药品(顺铂)在两种细胞系中的叠加效应。然而,在p31和SPC111细胞中,尼达尼布(nintedanib)和顺铂之间没有明显的协同作用,而且,在20个人类MPM细胞系中,顺铂和尼达尼布(nintedanib)敏感性之间没有相关联性。

  尼达尼布(nintedanib)体外对MPM细胞增殖、迁移和凋亡及其下游靶受体讯号转导的影响。

  采用五种MPM细胞系进行BrdUrd掺入实验,研究尼达尼布(nintedanib)对肿瘤细胞增殖的影响。该药品在各MPM细胞系中均表现出显著的抗增殖作用,且呈剂量依赖性。

  为了研究细胞凋亡的诱导,我们进行了TUNEL分析,以检查细胞凋亡过程中的DNA片段。尼达尼布(nintedanib)医治后细胞凋亡率明显上升,仅在SPC212和VMC40细胞中被证实。

  为了研究尼达尼布(nintedanib)的抗氧化活性,我们使用了五种对该药品敏感性不同的人MPM细胞系。尼达尼布(nintedanib)处置(1或3mol/L)能显著减少各细胞系的迁移活性。

  我们进行了尼达尼布(nintedanib)对Erk、Akt和S6磷酸化作用的时程实验,以研究该药品抗癌作用背后的分子机制。MPM细胞暴露于0.5mol/L尼达尼布(nintedanib)的时间从5分钟到24小时不等。通过Westernblot检查上述蛋白的活化情况。Erk1/2的磷酸化在每个细胞系中早20分钟就被有效阻断。可能是由于细胞密度和生长因子浓度的变化,在24小时的孵育过程中,溶剂对照组的Erk激活也下降了。然而,在p31和VMC40细胞中,Erk磷酸化的抑制是明显的,即使在这之后的时间点。

  在SPC111和M38K细胞中,抑制作用较弱,而在SPC212细胞中无抑制作用。Akt磷酸化在p31、SPC212、M38K和VMC40细胞中均有抑制作用,但在后两种细胞系中仅在较晚的时间点(24小时)有抑制作用。尼达尼布(nintedanib)(0.5mol/L)对SPC111细胞中Akt的激活没有影响,而SPC111细胞是整个研究小组中耐尼达尼布(nintedanib)的细胞系。该药品对S6磷酸化的影响能够忽视不计。

  尼达尼布(nintedanib)抑制人MPM在体内的生长,增加小鼠的生存负载原位人MPM异种移植。

  为了检验尼达尼布(nintedanib)的体内有效性,我们使用了原位MPM模型,将人p31或SPC111MPM细胞注射到SCID小鼠的胸腔。

  在第一组实验中,从p31细胞接种后第21天开始,通过PO或IP给药50毫克/kg尼达尼布(nintedanib)。根据我们的初步实验(数据未显示),到目前为止,在小鼠的胸膜上已经能够看到几个肿瘤结节。p31细胞高表达PDGFRB和FGFR1受体,它们对尼达尼布(nintedanib)相对敏感,但对顺铂不敏感。尼达尼布(nintedanib)耐受性良好,在医治时间段无任何毒性迹象。经PO处置的动物存活率呈良好趋势,但无显著好处(P=0.059vs.PO对照)。然而,尼达尼布(nintedanib)在给予IP时显著增加了小鼠的寿命(P=0.0008)。

  重要的是,尼达尼布(nintedanib)IP也显著抑制了动物的相对体重减轻(P=0.0337),因为实验结束时整体情况较好。我们对这些数据的解释是,尼达尼布(nintedanib)IP不仅增加了正位生长的人类MPM肿瘤小鼠的生存,而且还干扰了MPM诱导的恶病质。为了进一步证实尼达尼布(nintedanib)的抗癌作用,体内的MPM生长也通过磁共振成像检测。虽然对照组动物在植入肿瘤后的第25天胸内肿瘤负担明显,但接受尼达尼布(nintedanib)医治的动物肿瘤肿块明显降低。

  在第二组原位MPM异种移植实验,延长尼达尼布(nintedanib)标准化学疗法被植入了两个不同的人类MPM细胞系,奔跑和SPC111。尼达尼布(nintedanib)管理IP,在上述的体内实验中,这条路线的政府比阿宝被证明是更有效的医治。与未医治的对照组相比,我们能够证明在两种细胞模型中,单独使用顺铂/培美曲塞化学疗法或单独使用尼达尼布(nintedanib)的小鼠的肿瘤负荷显著减少。与未医治的对照肿瘤相比,联合化学疗法和抗血管生成方案(包括尼达尼布(nintedanib)或贝伐珠单抗)在两种细胞模型中也显示出显著的体内肿瘤生长抑制
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潜力。

  在第二组体内实验中,另一个关键的观察是,在标准化学疗法中加入尼达尼布(nintedanib)比单独化学疗法产生明显更高的反应。这些反应与贝伐珠单抗联合化学疗法的结果相似(P31肿瘤)或更好(SPC111肿瘤)。这里还需要提到的是,尼达尼布(nintedanib)与单独的贝伐珠单抗不同,在VEGF-A基线水平较高的p31肿瘤中,尼达尼布(nintedanib)单独被证明是比标准化学疗法更有效的体内MPM生长抑制剂。

  尼达尼布(nintedanib)能有效地在不依赖基线VEGF-A表达的情况下,在正位生长的人类MPM异种移植中阻断血管生成。

  使用CD31作为内皮标志物的形态学分析显示,与未医治的低基线VEGF-ASPC111肿瘤相比,基线VEGF-A高表达的对照组p31肿瘤微血管面积(MVAs)明显延长(区别为2.7%±1.2%和1.2%±0.8%);P=0.067)。与尼达尼布(nintedanib)有效的体内MPM生长抑制作用一致,在两种细胞模型中,尼达尼布(nintedanib)医治(单独或联合化学疗法)肿瘤的MVAs显著减少(与对照组相比)。

  但有趣的是,我们没有观察到使用贝伐珠单抗或不使用化学疗法的p31或SPC111肿瘤MVAs的显著减少。在两种细胞模型中,尼达尼布(nintedanib)的抗血管毒作用伴随着肿瘤内坏死的延长。这在联合尼达尼布(nintedanib)/化学疗法组中明显。尼达尼布(nintedanib)作为单一药品显著延长MPM细胞凋亡(P=0.0317;与控制)和p31肿瘤增殖下降(P=0.0341vs.对照组)。尼达尼布(nintedanib)一瓶好多钱?有需要的患病者能够咨询[药道网]海外医疗。详情请扫码咨询:

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